Roche_Light Cycler 480II熒光定量PCR儀主要應用于哪里?
熒光定量檢測系統由熒光定量PCR儀,實時熒光定量試劑,通用電腦,自動分析軟件等構成。設備由熒光定量系統和計算機組成,用來監測循環過程的熒光。
與實時設備相連的計算機收集熒光數據。數據通過開發的實時分析軟件以圖表的形式顯示。原始數據被繪制成熒光強度相對于循環數的圖表。原始數據收集后可以開始分析。實時設備的軟件能使收集到的數據進行正常化處理來彌補背景熒光的差異。正常化后可以設定域值水平,這就是分析熒光數據的水平。樣品到達域值水平所經歷的循環數稱為Ct值(限制點的循環數)。域值應設定在使指數期的擴增效率為大,這樣可以獲得準確,可重復性的數據。如果同時擴增的還有標有相應濃度的標準品,線性回歸分析將產生一條標準曲線,可以用來計算未知樣品的濃度。
所謂熒光定量PCR儀技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基因,利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
Roche_Light Cycler 480II熒光定量PCR儀已經應用于基礎科學研究、臨床診斷、疾病研究及藥物研發等領域,主要的應用在以下方面:
1.DNA或RNA的定量分析。包括病原微生物或病毒含量的檢測,轉基因動植物轉基因拷貝數的檢測,RNAi基因失活率的檢測等。
2.基因表達差異分析。例如比較經過不同處理樣本之間特定基因的表達差異(如藥物處理、物理處理、化學處理等),特定基因在不同時相的表達差異以及cDNA芯片或差顯結果的確證
3.基因分型。例如SNP檢測,甲基化檢測等。
隨著實時Roche_Light Cycler 480II熒光定量PCR儀技術的推廣和普及,該技術必然會得到更廣泛的應用。